Übersicht von Immunodiagnosis
1. grundlegende konzept
(1) antikörpern (Ab) und antigenen (Ag)
Antikörper: Es bezieht sich auf die schutz protein produziert durch die körper aufgrund antigen stimulation, sezerniertes durch effektor B zellen in wirbeltieren, die können unterteilt werden in IgG, IgM, IgA, igD, und IgE. IgG ist die isotyp mit die höchste inhalt in serum und körper flüssigkeiten, buchhaltung für 75% zu 80%. IgG ist die primäre antikörper produziert durch die sekundäre immunantwort, die "wichtigsten kraft" der körper der anti-infektion, und die meisten verwendet antikörper in immunodiagnosis.
Antigen: es bezieht sich auf eine substanz, die können verursachen die produktion von antikörpern und jede substanz, die können induzieren eine immun antwort in die körper. Antigene sind ausländische, makromolekularen, und spezifische. Die spezifität von eine antigen bedeutet, dass ein antigen können nur zu binden die entsprechenden antikörper oder effektor T zellen, die chemische gruppen bestimmen auf die molekül der oberfläche, genannt antigenic determinanten. Die molekulare gewicht der antigen ist in der regel> 10kDa, und die größeren die molekulare gewicht, die stärker die antigenicity.
(2) polyklonalen antikörpern und monoklonalen antikörpern
Polyklonalen antikörper: natürliche antigen moleküle oft enthalten eine vielzahl von verschiedenen antigenic epitopes, die stimulierung der körpereigenen immunsystem mit diesem antigen können aktivieren eine vielzahl von B zell klone zur gleichen zeit, und die resultierende antikörpern werden enthalten eine vielzahl von antikörpern gegen verschiedene epitopes, so sie sind genannt polyklonalen antikörpern.
Die monoklonalen antikörper ist eine hoch homogene antikörper produziert durch eine einzel B zelle klon, dass nur ziele eine spezifische epitop. Es ist in der regel vorbereitet mit hybridom technologie. Effektor B zellen und myeloma zellen sind verschmolzen zu form B zelle hybridomas. EINE monoklonale antikörper kann produzieren durch kultivierung einer einzigen hybridom zelle in eine bevölkerung von zellen spezifisch für eine epitop. Die affinität und spezifität von monoklonalen antikörpern sind im allgemeinen besser als die von polyklonalen antikörpern.
(3) rekombinante antikörper und rekombinante antigene
Rekombinante antikörper: EINE gentechnisch veränderte antikörper ist eine antikörper produziert in vitro mit gen rekombination technologie und protein engineering technology. Erhalten die gen sequenz der antikörper, konstruieren ein ausdruck vector, und transfer es in ein ausdruck host (wie hefe, insekten zellen, säuger zellen, oder bakterien). In diese weise, die produktion von antikörpern ist befreit die einschränkungen des immunsystems. Zur gleichen zeit, die beide voll-länge antikörpern und verschiedene antikörper fragmente können produzieren.
Rekombinante antigene: In Der Regel, die rekombinante antigene beziehen zu rekombinante proteine in essenz und sind auch proteine produziert in vitro durch gen rekombination technologie und protein engineering technology.
2. prinzipien von immunodiagnosis
(1) methode von doppel monoklonalen antikörper sandwich
Doppel monoklonalen antikörper sandwich methode: verwenden eine feste phase träger zu mantel eine antikörper und label eine andere beschriftet antikörper zu erkennen das antigen zu werden getestet, und bilden dann ein komplex von beschichtet Ab-Ag-beschriftet Ab. Diese methode vor allem erkennt antigenic substanzen.
Bild kredit: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(2) indirekte methode
Indirekte methode: eine erkennung methode in die eine solide-phase träger ist verwendet zu immobilisieren die antigen und label die sekundäre antikörper. Diese methode ist vor allem zu erkennen IgG antikörper in proben. EIN komplex von die beschichtete Ag-ziel Ab-beschriftet sekundäre Ab ist gebildet zu erkennen die antikörper in die probe.
Bild kredit: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(3) erfassen methode
Erfassen methode: eine erkennung methode in die eine solide-phase träger ist verwendet zu beschichten, die sekundäre antikörper und eine weitere belastung von markierten antigen zu erkennen die antikörper. EIN komplex von die beschichtete sekundäre Ab-ziel Ab-beschriftet Ag ist gebildet und getestet. Diese methode ist vor allem zu erkennen IgM in die probe.
Bild kredit: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(4) wettbewerb methode
Wettbewerb methode: konkurrenzfähiger bindung des beschichtet/beschriftet antikörper mit der markierten/beschichtet antigen und die test antigen. Diese methode ist vor allem zu erkennen kleinere molekül antigene.
Bild kredit: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
Methode 1: mantel die antikörper auf die feste phase, label die antigen, fügen sie die probe, die antigen zu getestet werden konkurriert für die antikörper bindung website, waschen, ausgang das ergebnis
Methode 2: mantel die antigen auf die feste phase, label die antikörper
3. die entwicklung von immunodiagnosis
Immunodiagnosis gilt immunologie theorien, techniken, und bedeutet zu diagnostizieren verschiedene krankheiten und bestimmen immun status. Mit technologie entwicklung, immunodiagnosis hat unterzogen immunoelectrophoresis, niederschlag und agglutination assays, radioimmun, immunofluorescence, enzym-immunoassay, immunoturbidimetrie, kolloidalem gold und fluoreszierende mikrosphären kennzeichnung, blotting membran streifen, chemiluminescence, protein chips, mikrofluidik control technologie und einzelnen molekül erkennung.
(1) enzym-immunoassay (ELISA)
Enzym-immunoassay (ELISA) ist eine erkennung methode, die kombiniert die immun reaktion prinzip mit immobilisierung technologie und enzym kennzeichnung technologie. Erste, verwenden eine polystyrol multi-gut platte zu mantel die antigen/antikörper, binden die substanz zu getestet werden in die probe, und hinzufügen meerrettich peroxidase (HRP) oder alkalische phosphatase (AP) nach dem waschen zu label die antikörper/antigen zu bilden eine immun komplexe. Dann fügen sie eine enzymatische chromogenen substrat und eine stop lösung zum beenden der reaktion. Schließlich, qualitativ oder quantitativ bestimmen die probe inhalt analyten durch die farbe OD.
Bild kredit: https://www.biotekchina.com.cn/anwendungen/elisa-and-related-immunoassays.html
(2) kolloidalem gold/fluoreszenz immunchromatographie
Kolloidalem gold: beziehen sich auf die gold sol mit die dispergiert phase partikel durchmesser zwischen 1 und 150 nm, und die farbe ist orange-rot zu lila-rot.
Kolloidalem gold immunchromatographie: eine erkennung technik, dass verwendet kolloidalem gold-beschriftet antikörper, verwenden nitrocellulose membran (NC membran) als eine feste phase träger zu mantel antigen/antikörper, und verwendet die kapillare action der NC membran zu flüssigkeitschromatograph die flüssigkeit von einem ende der membran zu das andere ende, zur gleichen zeit, Eine immun reaktion auftritt während der chromatographie.
Fluoreszenz immunchromatographie: eine immunochromatographic erkennung technologie verändert den kolloidalem gold in fluoreszierende mikrosphären kennzeichnung.
Bild kredit: https://www.researchgate.net/figure/A-The-composition-of-colloidal-gold-test-strip-B-Principle-of-the-CG-test-strip_fig5_340176469
(3) Chemiluminescence immunoassay
Chemiluminescence: bezieht sich auf die emission von licht, dass begleitet die prozess von chemischen reaktionen.
Chemiluminescence immunoassay methode: eine erkennung technik, dass verwendet multi-gut platte oder magnetische partikel als solide träger, mantel antigen/antikörper, hinzufügen analyten und luminophore zu label antigen/antikörper zu bilden eine immun komplexe, nach dem waschen, chemisch stimulieren die komplexe oder substrat zu emittieren licht, und bestimmt die inhalt der analyten durch die lumineszenz intensität.
Bild kredit: https://www.sepmag.eu/blog/bieten/335317/die-zwei-schlüssel-gründen-für-auswahl-chemiluminescence-für-immunoassays
(4) klassifizierung von chemiluminescence immunoassay
Klassifizierung durch beschichtung träger: Es ist unterteilt in platte chemiluminescence und magnetische partikel chemiluminescence. Derzeit, platte chemiluminescence hat eliminiert.
Klassifizierung durch lumineszenz: unterteilt in indirekte lumineszenz (enzymatische), direkt lumineszenz (acridin ester, luminol), und electrochemiluminescence.
